Gastro-entérite à rotavirus chez les enfants italiens: la sévérité des symptômes peut-elle être liée au virus infectieux

Le but de notre étude était de déterminer si la sévérité de la gastro-entérite à rotavirus pouvait être liée aux différentes caractéristiques des souches virales infectantes. La sévérité des symptômes cliniques chez les enfants atteints de gastro-entérite à rotavirus a été évaluée à l’aide d’un système de notation. et la fièvre, ainsi que les besoins des patients pour la réhydratation intraveineuse Les souches de rotavirus ont été caractérisées en déterminant l’électrophérotype de leur ARN double brin, le type et le sous-groupe G par un panel d’anticorps monoclonaux, et le type P par la transcription inverse-polymérase Réaction en chaîne Des souches avec un électrophérotype court, de type GP et sous-groupe I étaient associées à une gastro-entérite plus sévère et à des enfants plus âgés que ceux infectés par des souches de type électrophorétique, GP ou GP . Des différences dans les symptômes cliniques ont également été détectées chez des enfants infectés par des électrophérotypes longs et différents. avec les spécificités GP et GP

Dans le monde entier, les rotavirus sont la cause la plus importante de diarrhée aiguë sévère chez les jeunes enfants. Les rotavirus sont responsables d’une morbidité élevée dans les pays développés et d’une mortalité élevée dans les pays en développement. été réalisée en révélant le profil de migration des segments de l’ARN génomique viral double brin par électrophorèse PAGE; De plus, avec l’EIA, il est possible de déterminer les spécificités des sous-groupes I SG I et II SG II associées aux grandes protéines capsidiques internes VP et G associées à la protéine capsidique externe VP Plus récemment, les spécificités du sérotype P associées au mineur la protéine de capside externe VP a été prédite par une méthode de typage basée sur l’analyse de transcriptase inverse-PCR RT-PCR électrophérotype, sous-groupe, et G et P sont généralement liés. En fait, souches de VRC avec long électrophorèse segment de gène plus rapide trouvé pour être associé à la spécificité SG II et au type GP , GP , GP ou GP , alors que les souches de VRC avec électrophorèse court segment de gène plus lent présentent généralement une spécificité SG I et GP Jusqu’à présent, les quelques études menées pour tenter de corréler les spécificités de l’électrophérotype, du sous-groupe et du G avec l’information clinique concernant la sévérité de la maladie ont généralement été peu concluantes , ou, au mieux, elles ont montré t les différences ne semblent pas avoir une importance clinique majeure Le but de notre étude était d’examiner la relation entre les caractéristiques cliniques de l’entérite à VRC et les électrophérotypes, les sous-groupes et les types G et P du virus

Matériaux et méthodes

Conception de l’étude Tous les enfants qui se sont présentés à l’hôpital pour enfants G Di Cristina de Palerme, en Italie, de janvier à mai, avec une diarrhée, ont été évalués par le personnel médical du service des urgences; les personnes admises à l’hôpital étaient considérées comme admissibles à l’étude si elles présentaient un diagnostic primaire de diarrhée aiguë – défini comme ⩾ selles liquides dans une période de h avec apparition soudaine, avec ou sans vomissements, d’une durée de ⩽ jours – sans identification cause pour les symptômes autres que la gastro-entérite infectieuse Diarrhée de & gt; L’alimentation était interrompue pendant h, et une solution de réhydratation administrée par voie orale avec une osmolarité réduite a été fournie. Du lait sans lactose a été utilisé pour refeed les enfants & lt; Le personnel médical du département des maladies infectieuses a interviewé les adultes accompagnant les enfants, a examiné les enfants et a rempli un formulaire avec des aspects démographiques sexe et âge et la durée des données cliniques de l’enfant. la diarrhée et le nombre de selles par jour, l’apparition et la durée des vomissements et de la fièvre, et la présence de mucus ou de sang dans les selles; le critère pour commencer la réhydratation iv était une déshydratation estimée de% chez les enfants refusant ou incapables d’ingérer la solution de réhydratation administrée par voie orale ou de consommer le régime de riz et de pomme. Un système de notation légèrement modifié par rapport à Flores et al. pour classer la gravité des cas Cinq paramètres cliniques ont été notés: durée de la diarrhée & lt; journées, ; – journées, ; & gt; jours,, le nombre maximum de mouvements de l’intestin par jour des mouvements de l’intestin,; – mouvements intestinaux, ; & gt; selles, durée des vomissements, pas de vomissements, – journées, ; & gt; jours, l’apparition de la fièvre non, oui, et nécessité de la réhydratation iv non; oui, les échantillons de selles ont été collectés en h après l’admission de chaque patient à l’hôpital, pour éviter l’inclusion des cas nosocomiaux. Les échantillons ont été divisés en aliquots, en fonction de la quantité de selles disponibles, et conservés à – ° C jusqu’à PES. L’ARN viral a été réalisé sur% gels polyacrylamide, comme décrit ailleurs Les électrophérotypes ont été classés en divisant les segments d’ARN en groupes, selon Lourenco et al EIA avec des anticorps monoclonaux G typage a été réalisée par EIA en utilisant type, -, -, anticorps monoclonaux neutralisants spécifiques, -, -, et spécifiques réactifs avec la protéine virale VP, et sous-groupe a été réalisé par un EIA avec des anticorps monoclonaux spécifiques SG I- et SG II réactifs avec la protéine virale VP, comme décrit ailleurs RT-PCR P a été réalisée par RT-PCR avec de l’ARN extrait de poudre de verre, comme décrit ailleurs , en utilisant des amorces spécifiques P -, P -, P -, P – et P TechnologiesBactériologie Tous les sp des échantillons ont été étalés sur des géloses MacConkey, Salmonella-Shigella et thiosulfate-citrate-sels biliaires-saccharose, incubés à ° C pendant h, et examinés pour la présence de Salmonella, Shigella, vibrions et autres entéropathogènes par des méthodes standard. Toutes les variables ont été analysées à l’aide du test de Shapiro-Wilk W, un test de normalité puissant , et, comme aucune n’a eu de distribution normale, seuls les tests non paramétriques ont été réalisés avec Statistica StatSoft et Epi Info Centres. Dans un premier temps, l’analyse de variance de Kruskal-Wallis a été utilisée pour comprendre s’il existait des différences de variables telles que l’âge ou la durée du vomissement parmi les différents groupes de patients, puis, dans le cas de résultats positifs, en utilisant le test U de Mann-Whitney Les variables catégorielles ont été analysées par des tables de fréquences multi-voies, et la valeur Pear de Pearson a été calculée en cas de résultats positifs, les groupes ont été analysés en utilisant des tables de fréquence. Le coefficient d’ordre de rang de Spearman a été calculé pour vérifier l’existence de corrélations entre les variables du niveau de P & lt; a été utilisé pour toutes les analyses

Résultats

De janvier à mai, des échantillons de selles ont été obtenus et examinés par PAGE Un total de% des spécimens étaient positifs pour le rotavirus du groupe A. Dans les cas, une co-infection Salmonella-VFC a été documentée. Le rotavirus non-groupe A n’a pas été détecté. Les enfants infectés ont varié de jours à années médian, mois Un total de% patients étaient des garçonsFourteen électrophérotypes différents ont été identifiés par PAGE, mais seulement bbea, bbfb, bcea, cbea et ccea ont été détectés dans% des échantillons Selon les anticorps monoclonaux utilisés ,% souches appartenaient à SG I et% à SG II; % de souches n’étaient pas groupables

Figure Vue largeTélécharger la lameChemical du modèle de migration des électrophorétiques identifiésFigure Vue grandDownload slideSchimatique du motif de migration des électrophérotypes identifiésEn ce qui concerne les spécificités G, les souches% HRV appartenaient au type G,% à G,% à G,% à G,% à G, et% à G, alors que% n’étaient pas typables Trente-trois des souches non typables constituaient% de toutes les souches avec des électrophérotypes courts Dans le tableau, les associations entre électrophérotype longueur long et court, sous-groupe et type G de toutes les souches VRC sont montré Nous avons observé que la majorité des souches avec de longs électrophérotypes appartenaient à SG II et aux types G ou G%, alors que les souches à électrophérotypes courts appartenaient à SG I et au type G%. Une association anomale entre électrophérotype et type G a été observée pour seulement les souches, toutes appartenant à SG I: avaient un long modèle cafa, caga, et aafa et G type; avait un motif court bbfb et G type; et avait un motif court bbeb et G

Table View largeTélécharger slideAssociations entre l’électrophérotype, le sous-groupe et le type G de souches de rotavirus humain trouvées chez les enfants à Palerme, ItalieTable View largeTélécharger slideAssociations entre électrophérotype, sous-groupe et type G de souches de rotavirus humain trouvées chez les enfants à Palerme, ItalieMalgré le fait analyse faite séparément pour sous-groupe, type G, et électrophorétique exhibé des différences statistiquement significatives données non montrées, nous avons décidé d’analyser les données pour la gastro-entérite causée par les associations de type électrophérotype-G prévalentes: bbea-G, bbea-G, cbea-G, cbea- G, cbea-G non typable GNT, bcea-G, ccea-G, bbfb-G, et bbfb-GNT Le typage P a été réalisé sur% des souches de VRC présentant des motifs bbea-G et bbea-G et sur toutes les souches de VFC avec les modèles bbfb-G et bbfb-GNT Toutes les souches avec de longs électrophérotypes ont montré un type P Tous, mais avec des motifs courts ont été de type P ; le différent a présenté un type P Le score médian global score d’entérite causée par des souches avec le court électrophorotype bbfb G ou GNT était des points plus élevés que celui de l’entérite causée par des souches avec les électrophérotypes longs bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , et cbea-GNT P & lt; ; points plus élevés que pour les souches avec bcea-G P & lt; , cbea-G P & lt; , et ccea-G P & lt; ; et des points plus élevés que pour les souches avec cbea-G P & lt; Le score médian de l’entérite causée par les souches avec bbea-G était plus élevé que celui des souches avec cbea-G P & lt; et des points plus élevés que pour les souches avec cbea-G P & lt; Le score médian de l’entérite causée par les souches avec bbea-G était supérieur à celui des souches avec cbea-G P =

Figure Vue largeTélécharger Diapositive de l’entérite causée par les schémas d’association type électrophérotype-G du rotavirus humain les plus fréquents, tracés par la méthode des moustaches Les barres horizontales inférieure et supérieure correspondent aux th percentiles et aux percentiles, respectivement; les carrés représentent les valeurs médianes Le nombre de sujets est indiqué au bas de chaque colonne * Test significatif de Mann-Whitney U comparé à bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , cbea-G non typable GNT; P & lt; , bcea-G P & lt; , cbea-G P & lt; , ccea-G P & lt; , et cbea-G P & lt; comparé à cbea-G P & lt; et cbea-G P & lt; §Significant par rapport à cbea-G P = Figure Voir grandTélécharger Diapositive de l’entérite causée par les schémas d’association type électrophérotype-G du rotavirus humain les plus fréquents, tracés par la méthode des moustaches Les barres horizontales inférieure et supérieure correspondent aux th percentiles respectivement; les carrés représentent les valeurs médianes Le nombre de sujets est indiqué au bas de chaque colonne * Test significatif de Mann-Whitney U comparé à bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , cbea-G non typable GNT; P & lt; , bcea-G P & lt; , cbea-G P & lt; , ccea-G P & lt; , et cbea-G P & lt; comparé à cbea-G P & lt; et cbea-G P & lt; § Significatif par rapport à cbea-G P = La durée médiane des vomissements chez les enfants infectés par des souches de VFC avec des jours bbfb-GNT était plus longue que la durée des vomissements chez les enfants excrétant des souches avec bcea-G P & lt; et h plus long que la durée du vomissement chez les enfants excrétant des souches de bbea-G P & lt; , cbea-G P & lt; , cbea-G P =, ou cbea-GNT P & lt; La durée médiane de la fièvre chez les enfants qui ont excrété des souches de VFC avec des jours bbfb-GNT était plus longue que celle des infections causées par des souches de bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , cbea-G P & lt; , ou cbea-GNT P & lt; et h plus long que celui pour les infections causées par des souches avec cbea-G P & lt; La durée médiane de la diarrhée chez les enfants qui ont excrété des souches de VFC avec des jours de bbfb-GNT était plus longue que celle des infections causées par des souches de cbea-G P & lt; , cbea-GNT P & lt; , bcea-G P & lt; , ccea-G P & lt; ou bbfb-G P & lt; et h plus long que celui des infections causées par des souches de bbea-G P & lt; La durée médiane de la diarrhée chez les enfants qui ont excrété des souches de VRC avec bcea-G était plus longue que pour les infections causées par des souches avec cbea-G P & lt; , cbea-GNT P & lt; ou bbfb-G P & lt; et h plus long que celui des infections causées par des souches de bbea-G P & lt; La réhydratation intraveineuse était requise par% des enfants excrétant des souches avec bbfb-G et par% de ces souches excrétant avec bbfb-GNT; ces pourcentages étaient significativement plus élevés χ test, P & lt; que ceux pour les enfants infectés par des souches avec bbea-G%, cbea-G%, ou cbea-GNT% Différentes associations de type électrophérotype-G n’étaient pas liées à des différences significatives dans le nombre de selles par jour; à l’ordre dans lequel la diarrhée, la fièvre et les vomissements ont commencé; à l’apparition de symptômes respiratoires; ou à l’apparition de mucus ou de sang dans les selles L’âge des enfants qui ont excrété des souches de VFC avec le bbfb-G était une médiane de mois plus élevée que celle des enfants infectés par des souches de bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , cbea-GNT P & lt; , bcea-G P & lt; , bbfb-GNT P & lt; , ou ccea-G P = chiffre Les scores d’âge et de gravité n’étaient pas corrélés. Corrélation entre les rangs de Spearman, r & lt; ; P =

Figure Vue largeDownload slideAge des enfants excrétant les schémas d’association type électrophérotype-G du rotavirus humain les plus fréquents, tracés par la méthode des moustaches Les barres horizontales inférieure et supérieure correspondent respectivement aux th percentiles et au percentile inférieur; les carrés représentent les valeurs médianes Le nombre de sujets est indiqué au bas de chaque colonne * Test significatif de Mann-Whitney U comparé à bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , cbea-G non typable GNT; P & lt; , bcea-G P & lt; , bbfb-GNT P & lt; , et ccea-G P = Figure Voir grandDownload slideAge des enfants excrétant les profils d’association les plus fréquents du type électrophérotype G du rotavirus humain, tracés par la méthode des moustaches. Les barres horizontales inférieure et supérieure correspondent aux th percentiles respectivement; les carrés représentent les valeurs médianes Le nombre de sujets est indiqué au bas de chaque colonne * Test significatif de Mann-Whitney U comparé à bbea-G P & lt; , bbea-G P & lt; , cbea-G non typable GNT; P & lt; , bcea-G P & lt; , bbfb-GNT P & lt; , et ccea-G P = En ce qui concerne la distribution temporelle, les souches de type G étaient prévalentes de janvier à mars, les souches de type G étaient prévalentes de mars à mai et celles de type G étaient courantes de novembre à mai.

Figure Vue largeTélécharger la distribution temporelle des schémas d’association type électrophérotype-G du rotavirus humain les plus fréquents, tracés par la méthode des trichites. Les barres horizontales inférieure et supérieure correspondent respectivement aux th percentiles et aux percentiles supérieurs; Les carrés représentent les valeurs médianes Le nombre de sujets est indiqué au bas de chaque colonne NT, non typableFigure View largeTélécharger la diapositive Distribution temporelle des schémas d’association type électrophérotype-G du rotavirus humain les plus fréquents, tracés par la méthode des moustaches les percentiles th et th, respectivement; les carrés représentent les valeurs médianes Le nombre de sujets est indiqué au bas de chaque colonne NT, non typable

Discussion

Dans cette étude, nous avons tenté de corréler l’électrophérotype, le sous-groupe et le type G de souches de VFC avec les résultats épidémiologiques et cliniques pour une grande cohorte d’enfants atteints de gastro-entérite à rotavirus Parmi les quelques études précédentes dans lesquelles le La sévérité de l’entérite et les différents critères de classification de l’électrophérotype, du sous-groupe et du type G ont été considérés, seulement chez ceux de Bern et al et Yolken et al étaient des souches de VRC de type G associées à une déshydratation plus sévère. souches avec d’autres types de G, et les différences ne sont pas statistiquement significatives Nos observations sont compatibles avec une association de maladie plus sévère chez les enfants excrétant des souches de VRC avec des électrophérotypes courts fondamentalement représentés par bbfb que parmi ceux excrétant des souches avec de longs électrophérotypes; Il est intéressant de noter que parmi les sujets qui excrètent des virus avec des électrophérotypes longs, une maladie plus sévère semble être associée à des souches particulières bbea-G et bbea-G ayant le même type de P sur la base d’études suggérant que VP joue un rôle dans la virulence du rotavirus. , nous avons émis l’hypothèse que la sévérité des symptômes cliniques chez les enfants souffrant de gastro-entérite à rotavirus pourrait refléter soit des différences de virulence entre souches, soit l’introduction d’un nouveau type G et P dans la communauté. a montré que pendant les années précédant le début de l’étude, le type G avait rarement été trouvé Une nouvelle introduction de souches de type G à Palerme aurait pu rencontrer une population immunologiquement naïve pour ce sérotype De même, des enquêtes sur les types de VRC associés à la diarrhée chez les enfants de plusieurs pays ont montré des périodes dans lesquelles HRV avec le type G a été rarement détecté dans une communauté [,,] Ces périodes ont été interrompues La présence constante et généralisée de G dans toute communauté peut protéger la population contre les souches des serotypes G, G et G, qui partagent habituellement les spécificités de type Wa [P] et Wa II; en fait, une infection avec ces types de G induit apparemment une réponse de rappel contre l’autre Il est intéressant de noter que les schémas d’association bbfb-GP et bbfb-GNTP étaient les plus communs identifiés durant la saison d’hiver de novembre à mai. En ce qui concerne les souches avec bbfb-GNT, la détection de leur spécificité P soulève la possibilité qu’ils pourraient être de type G. Variation génétique dans le gène VP de type HRV G a été décrite Anticorps monoclonaux Les enfants infectés par les souches bbfb-G étaient ~ mois plus âgés que les enfants qui ont perdu d’autres souches. Nous pouvons supposer que cette épidémie a affecté les enfants qui avaient été infectés par un virus. HRV avec un autre type G quelques mois auparavant; cette hypothèse est corroborée par des données récentes dans la littérature qui impliquaient des souches de type G dans les réinfections symptomatiques de VFC chez les enfants plus âgés et les adultes [,,] Cependant, les différences observées dans cette étude ont trait au degré de sévérité de l’entérite. Certains résultats récents indiquent que le NSP identifié comme un facteur de virulence agissant comme une entérotoxine , nous pouvons spéculer qu’un facteur de virulence inconnu est associé à des souches de bbea, mais d’autres études sont nécessaires pour démontrer Cette hypothèse Les souches présentant des associations anormales, probablement d’origine animale ou résultant d’une recombinaison génétique, n’étaient pas associées à une entérite plus sévère et ne pouvaient probablement pas se propager dans la population humaine Iizuka et al. être impliqué dans l’adaptation de réassortants naturels aux humains En conclusion, notre recherche a réussi à Nous supposons que de telles différences sont dues à la réintroduction dans une zone géographique d’une souche qui n’avait pas circulé dans cette zone depuis longtemps, mais nous ne pouvons pas exclure la possibilité que de telles différences puissent être due à des facteurs intrinsèques liés aux souches de VFC qui expriment fortement certains facteurs de virulence D’autres études sur le rôle des facteurs de virulence dans les infections à VHR sont nécessaires pour élucider une telle hypothèseAcknowledgements