Test Xpert MTB / RIF des échantillons de selles pour le diagnostic de la tuberculose pulmonaire chez les enfants

Dans une étude de précision pilote, dépistage des selles Xpert chez des enfants suspectés de tuberculose pulmonaire PTB détectés /% cas de tuberculose confirmés par culture, y compris /% enfants infectés par le VIH et /% VIH non infectés Sputum Xpert détecté /% cas Tabouret prometteur pour diagnostic PTB chez les enfants infectés par le VIH

tuberculose, enfants, Xpert, selles, diagnosticLe diagnostic de tuberculose pulmonaire PTB reste difficile chez les jeunes enfants car ils expectorent rarement spontanément, ce qui rend difficile l’obtention d’un échantillon représentatif des voies respiratoires inférieures, et parce que le PTB est typiquement paucibacillaire. La confirmation de la maladie peut prendre des semaines et la maladie progresse rapidement chez les jeunes enfants. Par conséquent, les méthodes de diagnostic rapide telles que Xpert MTB / RIF Xpert sont une avancée importante. La précision du test Xpert des expectorations induites [ ], aspiration nasopharyngée , et lavage gastrique aspire des enfants a été récemment rapporté Cependant, l’obtention de tels spécimens, en particulier dans les soins primaires, peut être difficile En revanche, il est relativement facile d’obtenir des échantillons de selles leur crachat, Mycobacterium tuberculosis peut être détecté dans le s outil des enfants avec PTB Nous avons donc réalisé une étude pilote de la précision diagnostique du test Xpert des échantillons de selles d’enfants avec suspicion PTB

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Conception de l’étude, cadre et population

Il s’agissait d’une étude prospective dans laquelle des échantillons provenaient d’une cohorte en cours dans une clinique de soins primaires, Nolungile Clinic, Khayelitsha, Afrique du Sud et un hôpital pédiatrique tertiaire. Croix-Rouge Children’s Hospital, Cape Town, Afrique du Sud les années présentant des suspicions de PTB ont été inscrites consécutivement de juillet à mars Les critères d’inclusion étaient une toux qui durait plus longtemps que des semaines et au moins les suivantes: contact avec la tuberculose dans les mois précédents, perte de poids ou perte de poids au cours des mois précédents, test cutané à la tuberculine positif, ou une radiographie pulmonaire suggérant une PTB Les enfants ont été évalués à des mois pour évaluer le rétablissement ou la réponse au traitement Nous avons inclus tous les enfants chez qui des échantillons de selles et d’expectorations avaient été prélevés et où & gt; g Les enfants ont été exclus s’ils avaient reçu un traitement contre la tuberculose qui durait plus de quelques heures, qu’ils ne vivaient pas au Cap, qu’ils n’étaient pas en mesure d’assister à des visites de suivi, qu’ils n’avaient pas donné leur consentement éclairé, ou un échantillon de SI n’a pas été obtenu. Le consentement éclairé écrit a été obtenu d’un parent ou d’un tuteur légal. Le Comité d’éthique de la recherche de la Faculté des sciences de la santé de l’Université du Cap a approuvé l’étude.

Procédures

Les antécédents courants et l’examen physique ont été réalisés au moment de l’enrôlement Tous les enfants ont reçu une radiographie pulmonaire de référence et un test VIH du virus de l’immunodéficience humaine Test rapide du VIH suivi d’une réaction de confirmation en chaîne par polymérase pour les enfants mois Les selles des patients ont été prélevées sur un seul spécimen de commodité et les spécimens de l’EI ont été prélevés au départ comme décrit précédemment Les spécimens d’IS ont été traités en quelques heures. Les échantillons de selles ont été conservés à – ° C en quelques heures; Le test Xpert a été réalisé en quelques mois de stockage. La classification de la tuberculose était la suivante: «tuberculose définie», culture positive pour M tuberculosis; «Pas de tuberculose», culture négative pour les enfants tuberculeux M qui n’ont pas commencé le traitement antituberculeux et qui se sont cliniquement améliorés lors de la visite de suivi du mois; Les échantillons ont été décontaminés avec de la N-acétyl-L-cystéine et% de concentration finale d’hydroxyde de sodium, puis concentrés par centrifugation. Le culot a été remis en suspension dans une solution saline tamponnée au phosphate PBS BACTEC MGIT Becton Dickinson mL d’aliquote de l’échantillon remis en suspension et Xpert en utilisant mL de l’échantillon remis en suspension, auquel mL de réactif Xpert a été ajouté et traité selon les instructions du fabricantProcessus de traitement ultérieur, g de selles décongelées confirmées par pesée a été récupéré en utilisant pédiatrique FLOQSwabs Copan Italia, Brescia, Italy Swabs Les échantillons ont été laissés intacts pendant quelques minutes à température ambiante pour permettre aux grosses particules de se déposer avant l’élimination de parties aliquotes de surnageant de -mL. Une partie aliquote a été testée immédiatement avec Xpert et l’autre a été stockée à ° C. C pour les tests en double plus tard dans la semaine avant le test Xpert, le L’échantillon a été centrifugé à g pendant quelques minutes. Le surnageant a été jeté et le culot a été remis en suspension dans du PBS. Le test Xpert a ensuite été effectué selon les instructions du fabricant en utilisant un rapport de réactif Xpert à l’échantillon.

Analyses statistiques

L’étalon de référence était une culture liquide positive d’au moins IS échantillon L’analyse statistique a été réalisée avec la version Stata StataCorp, College Station, Texas Les caractéristiques du test diagnostique ont été déterminées avec des intervalles de confiance en% Un échantillon a été utilisé pour comparer la sensibilité de Xpert chez les enfants infectés et non infectés par le VIH

RÉSULTATS

Les tests ont été effectués sur des enfants, l’âge médian mois interquartile – mois dont% ont été infectés par le VIH et% ont été hospitalisés Parmi les enfants,% ont été classés comme ayant PTB définie,% comme potentiellement tuberculeux et% comme ne pas avoir la tuberculose cas de résistance à la rifampicine détectésDispositif Xpert de dépistage d’un seul échantillon de selles détecté /% d’enfants ayant une tuberculose définie chaque test Xpert détecté / cas,%; Tableau Un enfant avec une tuberculose possible était positif par test de selles Xpert mais négatif par culture et test IS Xpert Cet enfant était traité pour la tuberculose, et l’amélioration clinique était documentée lors du suivi Aucun enfant du groupe non tuberculeux n’était positif pour les selles Xpert âge médian des enfants atteints de tuberculose définie qui ont eu des résultats positifs Xpert selles mois; % CI, – n’était pas significativement plus élevé que celui des enfants avec un résultat négatif mois; % CI, -; P = Les enfants avec une tuberculose définie qui ont eu un test de selles positif Xpert ont eu une incidence similaire de consolidation alvéolaire% vs%, P = et% de compression nodale vs%, P = sur la radiographie thoracique chez les enfants avec un test Xpert négatif

Tableau Précision diagnostique de Xpert sur les selles et microscopie des expectorations induites et frottis sur l’expectoration induite, lors de l’utilisation de la culture liquide des échantillons d’expectoration induite comme test de référence Sensibilité au test diagnostique, positif / total de culture positif,% CI% Spécificité, test négatif / culture totale Négatif,%% CI Tabouret Xperta Tous /,% – /,% – VIH infecté /,% – /,% – VIH non infecté /,% – /,% – Expectorations induites Xpert All /,% – /,% – VIH /,% – /,% – VIH non infecté /,% – /,% – frottis d’expectoration induit Tous /,% – /,% – VIH infecté /,% – /,% – VIH non infecté /,% – /,% – Sensibilité du test de diagnostic, Test positif / Culture totale positive,%% CI Spécificité, Test négatif / Culture totale Négatif,%% CI Tabouret Xperta Tous /,% – /,% – VIH infecté /,% – /,% – VIH non infecté / ,% – /,% – Expectoration induite Xpert All /,% – /,% – VIH infecté /,% – /,% – VIH non infecté /,% – /,% – Induit frottis d’expectoration Tous /,% – /,% – VIH infecté /,% – /,% – VIH non infecté /,% – / ,% – Abréviations: IC, intervalle de confiance; VIH, virus de l’immunodéficience humaine Deux tests Xpert effectués sur un seul échantillon de sellesVérifier les cas de tuberculose détectés /% définitifs par LargeXpert, tandis que les enfants du groupe tuberculose potentiel étaient positifs à l’IS mais pas aux selles Xpert, tous traités pour la tuberculose et amélioration clinique documentée à la visite de suivi du mois Aucun enfant du groupe non tuberculeux n’était positif par le test IS Xpert La sensibilité de Xpert sur les selles par rapport à l’IS n’était pas significativement différente P =; cependant, cette analyse est limitée par la petite taille de l’échantillon

Tableau comparatif des résultats des tests de selles et d’expectorations induites Xpert Test diagnostique sillon Xpert Positif Négatif Total Crachats induits Xpert Positif Négatif Total a Tabouret Xpert Test diagnostique Positif Négatif Total Crachats induits Xpert Positif Négatif Total a aOne Résultat Xpert sur les expectorations induites enregistré comme indéterminéVoir Test LargeXpert sur Les échantillons de selles étaient positifs chez /% des enfants infectés par le VIH avec une tuberculose définie versus /% des enfants non infectés par le VIH avec une tuberculose définie P = pour la comparaison des enfants infectés et non infectés par le VIH Il n’y avait pas de différence significative entre les Enfants non infectés atteints de tuberculose confirmée par la culture Tous les enfants infectés par le VIH présentaient une consolidation alvéolaire et une compression nodale Parmi les enfants non infectés par le VIH,% avaient une consolidation alvéolaire et% une compression nodale P = pour la consolidation alvéolaire et P = pour les ganglions MMP Aucun enfant avec culture confirmée tuberculose infiltrée militaire sur radiographie thoraciqueMicroscopie thoracique de SI détectée / cas% de tuberculose définie Chez les enfants atteints de tuberculose définie, /% enfants infectés par le VIH ont un frottis positif comparé à /% enfants non infectés VIH P = Tous frottis les cas positifs ont été détectés par les tests Xpert de selles et d’expectorations

DISCUSSION

Cette étude pilote suggère que le test Xpert des échantillons de selles d’enfants suspectés PTB est prometteur en tant qu’approche diagnostique, en particulier pour les enfants infectés par le VIH chez lesquels des tests en double d’un seul échantillon de selles ont été détectés / cas. comparé à ISResults de selles Xpert testing dans une récente étude pilote sur des enfants ayant reçu des tests Xpert des selles et de l’aspiration gastrique et ayant reçu des tests Xpert sur les selles seulement a montré que les selles Xpert test a été réalisée sur des selles décontaminées, non directement sur des selles détectées de tuberculose intrathoracique confirmée par culture et de cas où M tuberculosis a été cultivé à partir de n’importe quel siteNotre étude a utilisé de petits volumes de selles à tester, car l’utilisation de volumes plus importants a conduit à des tests Xpert échoués données non montrées, probablement en raison du colmatage des filtres dans la cartouche Xpert Protocoles optimisés, qui sont Des études supplémentaires portant sur un plus grand nombre d’enfants utilisant ces protocoles optimisés de traitement des échantillons sont requises. Le test Xpert a permis un diagnostic rapide de PTB et de détection. Parce que Xpert est conçu pour être utilisé près du point de service, l’utilisation de selles comme échantillon pour le test Xpert peut être particulièrement appropriée, étant donné la facilité avec laquelle les selles sont obtenues en primaire. Le résultat qui suggère une sensibilité relativement élevée chez les enfants infectés par le VIH est important, car ce groupe d’enfants présente un risque élevé de progression rapide de la maladie et de mortalité. Ainsi, les tests Xpert sur les selles peuvent identifier un groupe d’enfants la thérapie peut sauver la vie

Remarques

Remerciements Nous remercions le Laboratoire national de microbiologie du Service de laboratoire de santé de l’hôpital Groote Schuur; les enfants qui ont participé à l’étude; les soignants des enfants; l’étude du personnel clinique et de laboratoire; Nous remercions le Dr V Azavedo et la ville de Cape Town pour leur soutien financier. Ce travail a été soutenu par le numéro de subvention du National Institutes of Health RHD-, et le personnel de la Croix-Rouge War Memorial Childrens, New Somerset Hospital et Nolungile. le National Health Laboratory Research Research Trust, le Medical Research Council d’Afrique du Sud, la National Research Foundation, l’Afrique du Sud et le Wellcome Trust numéro de subvention / B // ZPotential conflits d’intérêts MPN a reçu un financement de la Fondation pour Innovative New Diagnostics FIND ; Genève, Suisse pour évaluer la performance et l’impact de Xpert FIND est une organisation à but non lucratif qui collabore avec des partenaires industriels, dont Cepheid, le fabricant de Xpert, sur le développement, l’évaluation et la démonstration de nouveaux tests diagnostiques. soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués